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凱氏定氮法測定骨膠原肽中蛋白質含量

海能儀器

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儀器與試劑儀器
K1160全自動凱氏定氮儀,SH420F石墨消解儀
試劑
硫酸(分析純),硼酸(分析純),氧化鈉(分析純),溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑,催化劑片(3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅混合均勻壓片),0.1mol/L鹽酸標準滴定液。

實驗方法取樣
取0.2g左右樣品,加催化劑一片(或硫酸鉀3g與硫酸銅0.2g),再沿瓶壁滴加硫酸10.0ml。
消解
利用石墨消解爐進行消解,將消化管放在石墨爐上,蓋上排氣罩,連接廢氣吸收系統,消化完畢后,將消化管取下冷卻至室溫。消化過程采用曲線升溫模式,設置參數如下:

溫度(℃) 時間(min)
1 240 15
2 420 60

上機測試
待消化管內溶液冷卻至室溫后,將消化管放置于定氮儀上。定氮儀設置程序如下:

硼酸 稀釋水 堿液 蒸餾量 蒸汽流量
25ML 30ML 35ML 5min 99.99%

實驗結果儀器自動滴定并計算,計算公式如下

式中:c-標準酸摩爾濃度(mol/L)
W-樣品質量(g)
V0-空白樣滴定標準酸消耗量(mL)
V-樣品滴定標準酸消耗量(mL),準確到小數點后四位

編號 取樣量(g) 蛋白質含量(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.2030 98.059 98.243 0.31
2 0.2006 98.597
3 0.2028 98.072

結論通過數據可知,利用全自動凱氏定氮法測定骨膠原肽粉中的蛋白質含量平行性良好,且具有操作簡單,安全性高,節省人力等優點。

參考文獻[1]GB 5009.5-2016 食品安全國家標準 食品中蛋白質的測定[S].

注意事項樣品中蛋白含量較高,取樣及消解時應注意減少誤差。可以用稱量紙包裹住樣品投入消化管中,以防止樣品粘在消化管上部。實驗過程中濃酸濃堿較為危險,請小心操作。

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